WDR36 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-410298

Übersicht

WDR36 (WD-Repeat-Domäne 36) kodiert ein nukleoläres WD-Repeat-Protein, das an der Ribosomenbiogenese und der Prozessierung der prä-rRNA beteiligt ist und die Reifung der 18S-rRNA sowie den Aufbau der kleinen ribosomalen Untereinheit unterstützt. Über seine Rolle in der Nukleolusfunktion und im RNA-Stoffwechsel beeinflusst WDR36 die Proteostase und zelluläre Wachstumsprogramme, die von einer effizienten Translation abhängen. Genetische Variationen und eine veränderte WDR36-Funktion wurden mit okulären Phänotypen, einschließlich des primären Offenwinkelglaukoms, in Verbindung gebracht, was mechanistische Untersuchungen in relevanten Zelltypen motiviert. Eine Störung von WDR36 kann zudem genutzt werden, um zu untersuchen, wie Beeinträchtigungen der Ribosomenproduktion nukleoläre Stressantworten und nachgeschaltete Signalwege aktivieren.

Das WDR36 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WDR36-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WDR36-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WDR36 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDR36-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WDR36-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDR36-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WDR36-Exone abzielen, die für die WDR36-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WDR36-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDR36 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WDR36 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WDR36-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDR36 HDR-Plasmid (h) und WDR36 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WDR36-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WDR36-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.