Plásmido Doble Nickase (m) WDR18: sc-432062-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)WDR18 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa WDR18 (m) y el plásmido de doble nickasa WDR18 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Wdr18. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) WDR18 | sc-432062-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) WDR18 | sc-432062-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Wdr18 codifica el dominio de repeticiones WD 18 (WDR18), una proteína conservada con repeticiones WD40 que actúa como componente central del procesoma de la subunidad pequeña (SSU), necesario para la maduración del ARNr 18S y la biogénesis del ribosoma 40S. Al apoyar el procesamiento del pre-ARNr y el ensamblaje de complejos ribonucleoproteicos en el nucléolo, WDR18 ayuda a mantener la capacidad de traducción y la proteostasis durante el crecimiento y la proliferación celular. La alteración de factores del procesoma SSU se asocia de forma amplia con estrés nucleolar y con cambios en el control del ciclo celular, lo que convierte a Wdr18 en una diana relevante para estudiar cómo la biogénesis ribosomal se integra con la señalización de estrés y los programas de desarrollo. En sistemas murinos, la perturbación de Wdr18 permite investigar mecanismos que conectan defectos en el procesamiento del ARNr con fenotipos que se asemejan a disfunciones celulares tipo ribosomopatía.
WDR18 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Wdr18 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Wdr18. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Wdr18. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Wdr18 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.