Plasmide CRISPR d'Activation (h) WBP2: sc-409856-ACT

WBP2 (WW domain binding protein 2) agit comme une protéine adaptatrice et un co‑régulateur transcriptionnel, interagissant avec des partenaires contenant des domaines WW et intégrant des signaux de signalisation dans des programmes d’expression génique. Elle participe à des voies liées à la signalisation des récepteurs et à la signalisation nucléaire, notamment à la régulation transcriptionnelle via des interactions avec des complexes de coactivateurs et à la modulation de sorties transcriptionnelles associées à la prolifération et à la différenciation. L’activité de WBP2 a été étudiée dans le contexte d’états de signalisation altérés en biologie du cancer, où des changements des réseaux de co‑régulation peuvent influencer la croissance cellulaire et les phénotypes migratoires. Ces propriétés font de WBP2 un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels, la régulation des gènes dépendante des signaux et le remodelage de voies spécifique au contexte dans les cellules humaines.

WBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WBP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WBP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WBP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WBP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WBP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WBP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de WBP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.