Plasmide Double Nickase (h) WASP: sc-400712-NIC

WAS code la protéine du syndrome de Wiskott–Aldrich (WASP), un régulateur spécifique des cellules hématopoïétiques du remodelage du cytosquelette d’actine, qui relie la signalisation des récepteurs à la polymérisation ramifiée de l’actine dépendante d’Arp2/3. Grâce à des interactions avec Cdc42, les phosphoinositides et des adaptateurs à domaine SH3, WASP coordonne la formation de la synapse immunologique, la migration cellulaire, la phagocytose et le trafic endocytaire dans les leucocytes. L’activité de WASP intègre les voies en aval du récepteur des lymphocytes T, du récepteur des lymphocytes B, des récepteurs Fc et des récepteurs des chimiokines, modulant l’activation lymphocytaire et les réponses immunitaires innées. La dérégulation de WAS est associée à une immunodéficience et à des altérations de la biologie plaquettaire, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette dans les cellules immunitaires humaines.

WASP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WAS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WAS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WAS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WAS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.