Partículas Lentivirales de Activación (h) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-400013-LAC

CDKN1A codifica p21 (Waf1/Cip1), un inhibidor de quinasas dependientes de ciclina que hace cumplir los puntos de control del ciclo celular al inhibir complejos que contienen CDK2 y CDK1 y coordinar las transiciones G1/S y G2/M. p21 es un destacado efector aguas abajo de la señalización de p53 e integra respuestas al daño del ADN, al estrés de replicación y a programas de senescencia mediante la modulación de la síntesis de ADN dependiente de PCNA y del control de los puntos de control. Al ajustar el equilibrio entre el arresto proliferativo y la recuperación, CDKN1A influye en vías relacionadas con la estabilidad genómica, la diferenciación celular y la adaptación al estrés adyacente a la apoptosis. La expresión desregulada de p21 o su función dependiente del contexto está implicada en diversos aspectos de la biología del cáncer, modelos de resistencia a terapias, senescencia asociada a fibrosis y fenotipos de microambiente inflamatorio estudiados en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CDKN1A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CDKN1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Waf1/Cip1/CDKN1A p21. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CDKN1A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.