Plásmido Doble Nickase (h) VRL-1: sc-401648-NIC

El TRPV2 humano codifica el canal VRL-1, similar a un receptor de vaniloides, un canal iónico TRP no selectivo y permeable a Ca2+ que integra señales mecánicas, el calor y la señalización lipídica para modular la excitabilidad de la membrana y la dinámica del calcio intracelular. La actividad de VRL-1 influye en vías dependientes de calcio relacionadas con la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y la señalización aguas abajo asociada a MAPK y PI3K, que coordinan la migración celular, la diferenciación y las respuestas al estrés. Este canal se estudia de forma destacada en contextos de células inmunitarias y neuronales, donde el influjo de Ca2+ inducido por estímulos puede modular programas inflamatorios y la señalización sensorial. Alteraciones en la expresión de TRPV2 o en la función del canal se han asociado con fenotipos relevantes para enfermedad en biología del cáncer, respuestas al estrés en cardiomiocitos y procesos neuroinflamatorios, lo que respalda su uso como diana mecanística en investigaciones centradas en vías de señalización.

VRL-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TRPV2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TRPV2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TRPV2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TRPV2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.