VRL-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401648-NIC

Humanes TRPV2 kodiert den vanilloidrezeptorähnlichen Kanal VRL-1, einen nichtselektiven, Ca2+-permeablen TRP-Ionenkanal, der mechanische Reize, Wärme und Lipidsignale integriert und so die Membranerregbarkeit sowie die intrazelluläre Calciumdynamik beeinflusst. Die Aktivität von VRL-1 wirkt sich auf calciumabhängige Signalwege aus, die mit Zytoskelett-Umbau, Vesikeltransport sowie nachgeschalteter MAPK- und PI3K-assoziierter Signalgebung verknüpft sind und Zellmigration, Differenzierung und Stressantworten koordinieren. Der Kanal wird besonders in Immun- und Nervenzellkontexten untersucht, in denen stimulusinduzierter Ca2+-Einstrom Entzündungsprogramme und sensorische Signalübertragung modulieren kann. Eine veränderte TRPV2-Expression oder Kanalfunktion wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen in der Krebsbiologie, bei Stressantworten von Kardiomyozyten und in neuroinflammatorischen Prozessen in Verbindung gebracht, was TRPV2 als mechanistisches Ziel in pfadorientierter Forschung stützt.

VRL-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRPV2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRPV2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRPV2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRPV2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.