VRL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423688

Übersicht

Trpv2 kodiert den Mauskanal VRL-1 (TRPV2), einen nichtselektiven Kationenkanal aus der Familie der Transient-Receptor-Potential-Vanilloid-Kanäle, der zum stimulusinduzierten Ca²⁺-Einstrom beiträgt. VRL-1 ist an zellulären Prozessen wie Mechanosensation sowie an Antworten auf osmotischen oder thermischen Stress beteiligt und kann nachgeschaltete, calciumabhängige Signalwege beeinflussen, die sich auf die Membranerregbarkeit, die Zytoskelettdynamik und Transkriptionsprogramme auswirken. In Immun- und myeloischen Zelllinien wurde die TRPV2-Aktivität mit Phagozytose und inflammatorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht, während sie in erregbaren Geweben im Kontext der sensorischen Signaltransduktion untersucht wird. Eine veränderte TRPV2-Funktion oder -Expression wurde in Modellen für neuropathische Schmerzen, entzündliche Erkrankungen, Kardiomyopathie und krebsassoziierte Zellmigration untersucht, was seine Relevanz als mechanistisches Ziel in vielfältigen Signalwegen unterstreicht.

Das VRL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Trpv2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Trpv2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Trpv2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VRL-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Trpv2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VRL-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Trpv2-Exone abzielen, die für die VRL-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Trpv2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VRL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VRL-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Trpv2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VRL-1 HDR-Plasmid (m) und VRL-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Trpv2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Trpv2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.