VpreB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423683

Übersicht

Vpreb1 kodiert VpreB1, eine Komponente der Surrogat-Leichtkette, die sich mit λ5 (IGLL1) und der Immunglobulin-μ-Schwerkette zum Prä-B-Zell-Rezeptor (pre-BCR) während der frühen B-Lymphopoese in der Maus zusammenschließt. Die pre-BCR-Signalgebung koordiniert das Fortschreiten über den Kontrollpunkt vom Pro-B- zum Prä-B-Stadium, indem sie die Proliferation fördert, den allelischen Ausschluss der Schwerkette durchsetzt und die Leichtketten-Rekombination über Signalwege anstößt, die mit SRC-Familien-Kinasen, der SYK/BTK-Signalgebung sowie nachgeschalteten PI3K–AKT- und MAPK-Programmen verzahnt sind. Störungen dieser Achse beeinträchtigen die Entwicklungsdynamik von B-Zellen, verändern die Repertoirebildung und können die Immunkompetenz sowie Toleranzmechanismen beeinflussen. Da die pre-BCR-Funktion eng mit der Kontrolle entwicklungsbezogener Checkpoints verknüpft ist, wird Vpreb1 häufig in Modellen einer fehlgesteuerten B-Zell-Reifung und Immun­dysregulation untersucht, die für die hämatologische und autoimmunologische Forschung relevant sind.

Das VpreB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vpreb1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vpreb1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vpreb1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VpreB1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vpreb1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VpreB1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vpreb1-Exone abzielen, die für die VpreB1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vpreb1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VpreB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VpreB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vpreb1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VpreB1 HDR-Plasmid (m) und VpreB1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vpreb1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vpreb1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.