VPAC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423678

Übersicht

Vipr1 kodiert VPAC1, einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Klasse B, der vasoaktives intestinales Peptid (VIP) und das hypophysäre Adenylatcyclase‑aktivierende Polypeptid bindet, überwiegend an Gs koppelt und so das intrazelluläre cAMP erhöht. Die VPAC1‑Signalübertragung aktiviert PKA/CREB‑abhängige Transkriptionsprogramme und kann mit MAPK‑ und PI3K‑Signalwegen interagieren, um Zellproliferation, Differenzierung, die Funktion der epithelialen Barriere und Zytokinantworten zu regulieren. In Mausgeweben trägt VPAC1 zu neuroendokrinen und immunregulatorischen Schaltkreisen bei, einschließlich der Modulation inflammatorischer Signalgebung sowie der Aktivität glatter Muskulatur und sekretorischer Prozesse. Eine fehlregulierte VIP–VPAC1‑Achse wurde in Modellen chronisch‑entzündlicher Darmerkrankungen, asthmaähnlicher Atemwegsentzündung und der Signalgebung in tumorassoziierten Mikroumgebungen in Verbindung gebracht und stützt mechanistische Studien zu GPCR‑gesteuerten Immun‑ und Epithelprozessen.

Das VPAC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vipr1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vipr1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vipr1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPAC1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vipr1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPAC1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vipr1-Exone abzielen, die für die VPAC1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vipr1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPAC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VPAC1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vipr1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPAC1 HDR-Plasmid (m) und VPAC1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vipr1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vipr1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.