VMP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405940

Descripción general

VMP1 (proteína 1 de la membrana vacuolar) es una proteína integral de membrana necesaria para múltiples eventos de remodelación de membranas, en particular para el inicio y la progresión de la autofagia. Participa en la formación del fagóforo mediante interacciones con la maquinaria de la autofagia, favorece la biogénesis del autofagosoma y se ha implicado en la dinámica de los sitios de contacto entre el RE y otros orgánulos, que coordinan la transferencia de lípidos y la homeostasis de los orgánulos. Más allá de la autofagia, VMP1 contribuye al tráfico vesicular y a la adaptación al estrés celular, procesos que con frecuencia se ven alterados en el cáncer, la neurodegeneración y contextos inflamatorios, donde la proteostasis alterada y el recambio de orgánulos son características destacadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VMP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VMP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VMP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VMP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VMP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VMP1 para la investigación de la señalización de VMP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VMP1 críticos para la función de VMP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VMP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VMP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VMP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VMP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VMP1 (h) y el plásmido HDR VMP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VMP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VMP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.