Partículas Lentivirales de Activación (h) VMAT 2: sc-401308-LAC

SLC18A2 codifica el transportador vesicular de monoaminas 2 (VMAT2), una proteína integral de la membrana de las vesículas sinápticas que utiliza el gradiente electroquímico de protones para cargar dopamina, serotonina, norepinefrina, epinefrina e histamina en vesículas secretoras. Al regular el secuestro vesicular y la liberación cuantal, VMAT2 controla la neurotransmisión monoaminérgica y protege a las células de la oxidación citosólica de monoaminas, lo que lo vincula con el tráfico vesicular, el metabolismo de neurotransmisores y las vías de estrés oxidativo. La alteración de la expresión o la función de SLC18A2 se ha asociado con la vulnerabilidad de las neuronas dopaminérgicas y con fenotipos neuropsiquiátricos, lo que lo hace relevante para estudios sobre los mecanismos de la enfermedad de Parkinson, la regulación del estado de ánimo y la biología del consumo de sustancias. El VMAT2 humano también se utiliza como marcador y nodo funcional en modelos de diferenciación catecolaminérgica y serotoninérgica, y de dinámica de las vesículas sinápticas.

Las partículas de activación lentiviral VMAT 2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SLC18A2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral VMAT 2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SLC18A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de VMAT 2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SLC18A2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.