Plasmide Double Nickase (m) Vitamin D Receptor/VDR: sc-423664-NIC

Vdr code le récepteur de la vitamine D (VDR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui forme un hétérodimère avec RXR afin de réguler la transcription au niveau des éléments de réponse à la vitamine D et de remodeler les états de la chromatine sur divers loci cibles. Dans les cellules de souris, la signalisation du VDR intègre l’homéostasie du calcium et du phosphate à des programmes cellulaires contrôlant la différenciation, l’intégrité des barrières et la modulation immunitaire, et peut interagir avec les réseaux transcriptionnels liés à Wnt/β-caténine, NF-κB et MAPK. L’activité de Vdr influence l’expression génique des ostéoblastes et des ostéoclastes, les jonctions serrées épithéliales et les réponses antimicrobiennes, ainsi que des voies métaboliques sensibles aux signaux endocriniens. La perturbation de la transcription dépendante de Vdr est largement étudiée dans des modèles de troubles osseux et minéraux, de phénotypes inflammatoires et d’altérations de l’homéostasie épithéliale ou métabolique.

Vitamin D Receptor/VDR Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Vdr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Vdr. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Vdr. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Vdr.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.