Plasmide CRISPR d'Activation (m) Vitamin D Receptor/VDR: sc-423664-ACT

Le gène murin **Vdr** code le récepteur de la vitamine D (VDR), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui s’hétérodimérise avec RXR afin de se lier aux éléments de réponse à la vitamine D et de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’homéostasie du calcium et du phosphate, la différenciation épithéliale et la modulation immunitaire. VDR intègre des signaux issus de la signalisation des hormones stéroïdiennes avec le remodelage de la chromatine pour influencer le contrôle du cycle cellulaire, la fonction barrière et l’expression de gènes inflammatoires dans de nombreux tissus. En recherche biomédicale, les altérations de l’activité de **Vdr** sont fréquemment étudiées dans les contextes du métabolisme osseux et minéral, de la physiologie intestinale et de l’inflammation à médiation immunitaire, où des modifications de la transcription dépendante de VDR peuvent remodeler les réseaux de cytokines et les voies métaboliques. Ces fonctions font de **Vdr** un nœud central pour disséquer la régulation transcriptionnelle et les interactions entre voies de signalisation dans des phénotypes liés au développement et à la maladie, dans des modèles murins et des cellules en culture.

Vitamin D Receptor/VDR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Vdr sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Vitamin D Receptor/VDR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Vdr dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Vdr, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Vitamin D Receptor/VDR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Vdr natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Vitamin D Receptor/VDR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Vitamin D Receptor/VDR dans les cellules tumorales présentant une expression de Vdr silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.