Plásmido CRISPR de Activación (h) Vitamin D Receptor/VDR: sc-400171-ACT

VDR codifica el receptor de vitamina D, un factor de transcripción nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para unirse a elementos de respuesta a la vitamina D y coordinar programas génicos que controlan la homeostasis del calcio y del fosfato. Más allá del metabolismo mineral, VDR regula la diferenciación epitelial, la modulación inmunitaria y la integridad de las barreras al integrar señales a través de redes transcripcionales sensibles a MAPK, NF-κB y citocinas. Las alteraciones en la actividad o la expresión de VDR se han vinculado con fenotipos inflamatorios y autoinmunes, una regulación anómala del ciclo celular y cambios dependientes del contexto en estados transcripcionales asociados a tumores. Estas funciones convierten a VDR en un nodo central para estudiar la biología de los receptores de hormonas esteroideas y la regulación génica en diversos tipos celulares humanos.

Vitamin D Receptor/VDR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VDR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vitamin D Receptor/VDR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VDR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VDR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vitamin D Receptor/VDR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VDR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vitamin D Receptor/VDR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vitamin D Receptor/VDR en células tumorales con expresión de VDR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.