Veli3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423669

Descripción general

Lin7c codifica Veli3, un miembro de la familia LIN7 de proteínas andamiaje que contienen dominios PDZ y que organizan microdominios de membrana y acoplan receptores transmembrana a complejos de señalización citosólicos. En células de ratón, Veli3 contribuye al ensamblaje de redes de proteínas de polaridad y de uniones, influyendo en el tráfico basolateral, la localización de receptores y la organización del citoesqueleto. Mediante interacciones con MAGUK y reguladores de la polaridad, los complejos asociados a LIN7C pueden modular vías que gobiernan la integridad epitelial, la conectividad neuronal y el transporte mediado por vesículas. La desregulación de la polaridad celular y del andamiaje de las uniones se asocia con una arquitectura tisular aberrante y una transducción de señales alterada, lo que hace de Lin7c un objetivo útil para estudiar mecanismos relevantes para defectos del desarrollo y la remodelación asociada a enfermedades de la organización celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Veli3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lin7c en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lin7c junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lin7c tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Veli3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lin7c para la investigación de la señalización de Veli3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lin7c críticos para la función de Veli3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lin7c para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Veli3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Veli3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lin7c. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Veli3 (m) y el plásmido HDR Veli3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lin7c para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lin7c definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.