Particules Lentivirales d'Activation (m) VEGF: sc-423665-LAC

Vegfa code le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF), un ligand sécrété qui coordonne la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales afin de réguler l’angiogenèse développementale et pathologique dans les tissus de souris. La signalisation du VEGF mobilise principalement VEGFR2/KDR pour activer les cascades PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–PKC, en s’intégrant à des voies induites par l’hypoxie telles que le contrôle transcriptionnel dépendant de HIF‑1. Par le biais de ces réseaux, Vegfa influence la perméabilité vasculaire, le remodelage de la matrice extracellulaire et le recrutement de cellules murales de soutien lors de la maturation des vaisseaux. Une activité dérégulée de l’axe VEGF est impliquée dans des modèles de néovascularisation tumorale, de revascularisation induite par l’ischémie, de remodelage tissulaire inflammatoire et de néovascularisation oculaire, faisant de Vegfa un nœud central pour les études mécanistiques en biologie vasculaire.

Les particules d'activation lentivirales VEGF (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Vegfa dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales VEGF (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Vegfa, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de VEGF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Vegfa ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.