Plásmido Doble Nickase (r) VEGF: sc-437276-NIC
- Especies Diana: rat
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (r)VEGF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VEGF (r) y el plásmido de doble nickasa VEGF (r2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a . Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VEGF Anticuerpo (C-1): sc-7269
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (r) VEGF | sc-437276-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (r2) VEGF | sc-437276-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es una proteína señalizadora secretada que coordina la proliferación, migración y supervivencia de las células endoteliales para regular la angiogénesis y la permeabilidad vascular. A través de la señalización de las tirosina quinasas receptoras VEGFR1/VEGFR2, el VEGF activa las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK, PLCγ–PKC y eNOS, integrando señales derivadas de la hipoxia mediada por HIF-1 y de la remodelación de la matriz extracelular. La actividad alterada del VEGF se asocia con neovascularización patológica, edema y disfunción vascular inflamatoria en modelos de enfermedad retiniana, lesión isquémica, microambientes tumorales y reparación de heridas crónicas. En sistemas de rata, la perturbación de VEGF se utiliza comúnmente para investigar el patrón de los vasos, la integridad de las barreras sangre–tejido y el acoplamiento neurovascular.
VEGF El plásmido de doble nicasa (r) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus en líneas celulares rat. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de . Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de . Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.