Plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF (r): sc-437276
- Espèces cibles: rat
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- VEGF Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (r) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique VEGF, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VEGF Antibody (C-1): sc-7269
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF (r) | sc-437276 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF) est une protéine de signalisation sécrétée, se liant à l’héparine, qui stimule l’angiogenèse et la perméabilité vasculaire en activant des récepteurs tyrosine kinases tels que VEGFR2 à la surface des cellules endothéliales. La signalisation du VEGF se propage via les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–PKC afin de réguler la prolifération, la migration et la survie endothéliales, ainsi que des réponses de perméabilité liées à l’oxyde nitrique. Elle s’interface également avec les programmes du facteur induit par l’hypoxie (HIF) et le remodelage de la matrice extracellulaire pour coordonner la vascularisation des tissus au cours du développement et en situation de stress. Une activité du VEGF dérégulée est largement utilisée comme lecture mécanistique dans des modèles de néovascularisation pathologique, d’œdème associé à l’inflammation, de remodelage lié à l’ischémie et d’angiogenèse associée aux tumeurs.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF (r) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires rat. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VEGF.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de VEGF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de VEGF
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le VEGF plasmide CRISPR/Cas9 KO (r) et le VEGF plasmide CRISPR/Cas9 KO (r2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le VEGF plasmide HDR (r) et le VEGF (r2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.