Plásmido CRISPR de Activación (r) VEGF: sc-437276-ACT

El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) es un regulador central de la angiogénesis y de la permeabilidad vascular en los tejidos de rata, coordinando la proliferación, migración y supervivencia de las células endoteliales durante el desarrollo y la reparación de heridas. La señalización de VEGF a través de VEGFR2 activa las vías PI3K–AKT, MAPK/ERK y PLCγ–PKC, modelando la brotación vascular, la formación de la luz y la función de barrera en respuesta a la hipoxia y a señales inflamatorias. La actividad desregulada de VEGF se asocia con neovascularización aberrante, edema y remodelación inflamatoria crónica, lo que lo convierte en una diana clave para estudios mecanísticos de isquemia tisular, modelos de retinopatía y biología vascular asociada a tumores. VEGF también influye en la homeostasis neurovascular y microvascular renal, apoyando la investigación sobre perfusión específica de órganos y progresión fibrótica.

VEGF El plásmido de activación CRISPR (r) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VEGF El plásmido de activación CRISPR (r) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VEGF. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VEGF en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VEGF en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.