VEGF CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437276-ACT

血管内皮増殖因子（VEGF）は、ラット組織における血管新生および血管透過性の中枢的な調節因子であり、発生や創傷修復の過程で内皮細胞の増殖、遊走、生存を統合的に制御する。VEGFはVEGFR2を介したシグナル伝達によりPI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγ–PKC経路を活性化し、低酸素や炎症性刺激に応答して血管の芽出し、管腔形成、バリア機能を形作る。VEGF活性の制御異常は、異常血管新生、浮腫、慢性炎症性リモデリングと関連しており、組織虚血の機序研究、網膜症モデル、腫瘍関連血管生物学の研究における重要な標的となっている。さらにVEGFは神経血管系および腎微小血管の恒常性にも影響し、臓器特異的な灌流や線維化進行に関する研究を支える。

VEGF CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

VEGF CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性VEGFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるVEGF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるVEGF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。