Plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF-B (m): sc-423666

Présentation

Vegfb code le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire B (VEGF‑B), un ligand sécrété de la famille VEGF qui signale principalement via VEGFR1 (FLT1) et les neuropilines afin de moduler le comportement des cellules endothéliales et l’homéostasie vasculaire. Contrairement au VEGF‑A, fortement angiogénique, le VEGF‑B est fréquemment associé à la survie endothéliale, à la stabilisation des vaisseaux et à la régulation de la captation et du métabolisme des lipides dans les tissus à forte demande oxydative. La signalisation dépendante du VEGF‑B recoupe les voies PI3K–AKT et MAPK et peut influencer la fonction mitochondriale ainsi que les programmes de transport des acides gras. Des altérations de l’activité du VEGF‑B ont été étudiées dans des contextes de stress métabolique et de biologie cardiovasculaire, notamment la dysfonction vasculaire et la susceptibilité des tissus aux lésions ischémiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VEGF-B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vegfb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vegfb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vegfb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VEGF-B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vegfb pour l'étude de la signalisation de VEGF-B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vegfb essentiels à la fonction de VEGF-B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vegfb pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VEGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VEGF-B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vegfb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VEGF-B plasmide HDR (m) et le VEGF-B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vegfb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vegfb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.