VEGF-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423666
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VEGF-B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VEGF-B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VEGF-B Anticuerpo (RM0008-6E72): sc-101582
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VEGF-B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423666 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Vegfb codifica el factor de crecimiento endotelial vascular B (VEGF-B), un ligando secretado de la familia VEGF que señaliza principalmente a través de VEGFR1 (FLT1) y las neuropilinas para modular el comportamiento de las células endoteliales y la homeostasis vascular. A diferencia del VEGF-A, fuertemente angiogénico, el VEGF-B se asocia con frecuencia a la supervivencia endotelial, la estabilización de los vasos y la regulación de la captación y el metabolismo de lípidos en tejidos con alta demanda oxidativa. La señalización dependiente de VEGF-B converge con las vías PI3K–AKT y MAPK y puede influir en la función mitocondrial y en programas de transporte de ácidos grasos. Las alteraciones en la actividad de VEGF-B se han estudiado en contextos de estrés metabólico y biología cardiovascular, incluida la disfunción vascular y la susceptibilidad de los tejidos a lesiones isquémicas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VEGF-B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vegfb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vegfb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vegfb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VEGF-B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vegfb para la investigación de la señalización de VEGF-B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Vegfb críticos para la función de VEGF-B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vegfb para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VEGF-B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VEGF-B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vegfb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VEGF-B (m) y el plásmido HDR VEGF-B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vegfb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vegfb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.