Plásmido Doble Nickase (m2) VE-cadherin: sc-419596-NIC-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m2)VE-cadherin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VE-cadherin (m2) y el plásmido de doble nickasa VE-cadherin (m22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Cdh5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VE-cadherin Anticuerpo (F-8): sc-9989
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m2) VE-cadherin | sc-419596-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Cdh5 de ratón codifica la VE-cadherina, una proteína de las uniones adherentes específica del endotelio que media la adhesión homofílica célula–célula para mantener la integridad de la barrera vascular y la estabilidad de los vasos. La VE-cadherina se une a las cateninas y al citoesqueleto de actina para coordinar la remodelación de las uniones durante la angiogénesis y la polarización endotelial, y se integra con las vías de señalización de VEGF/VEGFR2 y de las GTPasas de la familia Rho para regular la permeabilidad y la transmigración de leucocitos. La función desregulada de Cdh5/VE-cadherina se ha implicado en la fuga vascular patológica, la disfunción endotelial asociada a la inflamación y la neovascularización aberrante observada en microambientes tumorales y en retinopatías. La edición génica de Cdh5 en ratón respalda estudios mecanísticos en biología endotelial, incluidas la dinámica de las uniones, ensayos de brotación angiogénica y modelos in vivo del desarrollo vascular y la disrupción de la barrera.
VE-cadherin El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdh5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdh5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdh5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdh5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.