VE-cadherin-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401695

Descripción general

PCDH12 codifica la VE-cadherina-2, una molécula de adhesión dependiente de calcio enriquecida en células endoteliales vasculares que favorece uniones célula–célula estables y la formación coordinada de la barrera. Al interactuar con complejos cadherina–catenina y conectarse con el citoesqueleto de actina, la VE-cadherina-2 contribuye a la organización de las uniones adherentes, la polaridad endotelial y la regulación de la permeabilidad durante la remodelación angiogénica. Su actividad se cruza con programas de señalización que ajustan la dinámica de las uniones, incluidas vías que influyen en la tensión del citoesqueleto y en las respuestas endoteliales a señales inflamatorias o mecánicas. La desregulación de la adhesión endotelial y del control de la barrera es relevante para fenotipos de disfunción vascular y ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar la integridad microvascular en modelos pertinentes de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VE-cadherin-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PCDH12 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PCDH12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PCDH12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VE-cadherin-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PCDH12 para la investigación de la señalización de VE-cadherin-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PCDH12 críticos para la función de VE-cadherin-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PCDH12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VE-cadherin-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PCDH12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VE-cadherin-2 (h) y el plásmido HDR VE-cadherin-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PCDH12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PCDH12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.