VDAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423662

Übersicht

Vdac2 kodiert den spannungsabhängigen Anionenkanal 2 (VDAC2), ein wichtiges Porin der äußeren Mitochondrienmembran, das den Metaboliten- und Ionenfluss zwischen Zytosol und Mitochondrien reguliert. VDAC2 ist an der mitochondrialen Atmung, der Redox-Homöostase und der Ca²⁺-abhängigen Signalübertragung beteiligt, indem es den ATP/ADP-Austausch beeinflusst und an Transportprozesse der inneren Membran koppelt. Zudem moduliert es die intrinsische Apoptose, indem es die Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran sowie Interaktionen mit Proteinen der BCL-2-Familie steuert und so den mitochondrialen Stoffwechsel mit Entscheidungen über das Zellschicksal verknüpft. Eine Fehlregulation VDAC2-assoziierter Signalwege wird mit veränderter Bioenergetik und Stressantworten in Verbindung gebracht, die für Mechanismen der Neurodegeneration, kardiometabolischer Erkrankungen und Überlebensphänotypen von Krebszellen relevant sind.

Das VDAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vdac2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vdac2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vdac2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VDAC2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vdac2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VDAC2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vdac2-Exone abzielen, die für die VDAC2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vdac2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VDAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VDAC2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vdac2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VDAC2 HDR-Plasmid (m) und VDAC2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vdac2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vdac2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.