Plasmide Double Nickase (h) VCPIP1: sc-409332-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VCPIP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VCPIP1 Double Nickase (h) et le plasmide VCPIP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VCPIP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VCPIP1 Antibody (C-12): sc-515291
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VCPIP1 | sc-409332-NIC | 20 µg | $410.00 |
VCPIP1 (valosin-containing protein interacting protein 1) code une enzyme de désubiquitination qui s’associe à l’ATPase AAA+ VCP/p97 afin de réguler le contrôle qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine. Grâce à l’activité catalytique de son domaine OTU, VCPIP1 participe à la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), au trafic membranaire et à la protéostasie en remodelant des chaînes d’ubiquitine sur certains substrats et en coordonnant leur prise en charge par la machinerie VCP/p97. La perturbation de l’homéostasie de l’ubiquitine liée à VCP/p97 est associée à la signalisation du stress cellulaire, à une altération de la dynamique des organites et à des voies impliquées dans la neurodégénérescence, faisant de VCPIP1 un nœud pertinent pour étudier comment le remodelage de l’ubiquitine influence la résistance au stress et les réseaux de dégradation. Une régulation altérée de ces voies est également étudiée dans le contexte de l’adaptation des cellules cancéreuses au stress protéotoxique et d’une signalisation de l’ubiquitine dérégulée.
VCPIP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VCPIP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VCPIP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VCPIP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VCPIP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.