Plásmido Doble Nickase (h) VCPIP1: sc-409332-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)VCPIP1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa VCPIP1 (h) y el plásmido de doble nickasa VCPIP1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a VCPIP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: VCPIP1 Anticuerpo (C-12): sc-515291
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) VCPIP1 | sc-409332-NIC | 20 µg | $410.00 |
VCPIP1 (proteína 1 que interactúa con la proteína que contiene valosina) codifica una enzima desubiquitinante que se asocia con la ATPasa AAA+ VCP/p97 para regular el control de calidad proteica dependiente de ubiquitina. A través de la actividad catalítica de su dominio OTU, VCPIP1 participa en la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD), el tráfico de membranas y la proteostasis, al editar cadenas de ubiquitina en sustratos selectos y coordinar su procesamiento por la maquinaria VCP/p97. La alteración de la homeostasis de la ubiquitina vinculada a VCP/p97 se relaciona con la señalización de estrés celular, la dinámica orgánular deteriorada y vías asociadas a la neurodegeneración, lo que convierte a VCPIP1 en un nodo relevante para estudiar cómo la remodelación de la ubiquitina influye en la resiliencia al estrés y en las redes de degradación. La regulación alterada de estas vías también se estudia en el contexto de la adaptación de células cancerosas al estrés proteotóxico y la señalización de ubiquitina desregulada.
VCPIP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VCPIP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VCPIP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VCPIP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VCPIP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.