Vav2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401490

Descripción general

VAV2 codifica Vav2, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) multidominio que activa GTPasas de la familia Rho, como RAC1 y CDC42, aguas abajo de las tirosina quinasas receptoras y de la señalización de integrinas. A través de su núcleo catalítico DH-PH y de interacciones mediadas por SH2/SH3, Vav2 coordina la remodelación del citoesqueleto de actina, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y la dinámica de las adhesiones focales que sustentan la migración y la adhesión celular. La señalización dependiente de Vav2 se cruza con vías que incluyen PI3K, MAPK y redes de quinasas de la familia Src, conectando señales extracelulares con respuestas transcripcionales y del citoesqueleto. La actividad o expresión desregulada de VAV2 se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo y con una reorganización de la señalización en múltiples contextos relevantes para la enfermedad, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la motilidad y la transducción de señales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Vav2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VAV2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VAV2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VAV2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Vav2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VAV2 para la investigación de la señalización de Vav2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VAV2 críticos para la función de Vav2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VAV2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Vav2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Vav2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VAV2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Vav2 (h) y el plásmido HDR Vav2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VAV2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VAV2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.