Vasohibin-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-407838-ACT

VASH2 codifica la Vasohibin-2, un regolatore citosolico della dinamica dei microtubuli che funziona come carbossipeptidasi della tubulina per generare α-tubulina detirosinata, influenzando così l’organizzazione del fuso mitotico, il traffico intracellulare e la motilità cellulare. Attraverso il controllo degli stati di modifica post-traduzionale dei microtubuli, VASH2 contribuisce a programmi di rimodellamento del citoscheletro collegati alla progressione del ciclo cellulare e a fenotipi migratori. Un’espressione alterata di VASH2 è stata associata a contesti di segnalazione legati all’angiogenesi e a caratteristiche della progressione tumorale in molteplici sistemi modello, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico che collega la regolazione dei microtubuli alla biologia vascolare e invasiva. Queste proprietà rendono VASH2 rilevante per studi sulla regolazione del citoscheletro, sul crosstalk endotelio–tumore e sui cambiamenti del comportamento cellulare dipendenti dal microambiente.

Vasohibin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di VASH2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Vasohibin-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus VASH2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione VASH2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Vasohibin-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus VASH2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Vasohibin-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Vasohibin-2 nelle cellule tumorali con espressione di VASH2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.