Plásmido CRISPR de Activación (h) Vasohibin-2: sc-407838-ACT

VASH2 codifica la vasohibina‑2, un regulador citosólico de la dinámica de los microtúbulos que funciona como una carboxipeptidasa de tubulina para generar α‑tubulina detirosinada, influyendo así en la organización del huso, el tráfico intracelular y la motilidad celular. Mediante el control de los estados de modificación postraduccional de los microtúbulos, VASH2 contribuye a programas de remodelación del citoesqueleto vinculados a la progresión del ciclo celular y a fenotipos migratorios. La expresión alterada de VASH2 se ha asociado con contextos de señalización relacionados con la angiogénesis y con características de progresión tumoral en múltiples sistemas modelo, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico que conecta la regulación de los microtúbulos con la biología vascular e invasiva. Estas propiedades hacen que VASH2 sea relevante para estudios sobre regulación del citoesqueleto, comunicación cruzada endotelio–tumor y cambios en el comportamiento celular dependientes del microambiente.

Vasohibin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VASH2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Vasohibin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VASH2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VASH2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Vasohibin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VASH2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Vasohibin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Vasohibin-2 en células tumorales con expresión de VASH2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.