VAP-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401777

Descripción general

AOC3 codifica la proteína de adhesión vascular-1 (VAP-1), una molécula de superficie de células endoteliales y de músculo liso que actúa como receptor de adhesión de leucocitos y como una amino oxidasa dependiente de cobre sensible a la semicarbazida (SSAO). Mediante la desaminación oxidativa de aminas primarias, VAP-1 genera aldehídos, amoníaco y peróxido de hidrógeno, vinculando la biología redox vascular con la regulación del tráfico de células inmunitarias a través del endotelio. La actividad de VAP-1 se cruza con la señalización inflamatoria, la dinámica de adhesión célula–célula y la remodelación de la matriz extracelular dentro del microambiente vascular. La desregulación de la expresión o de la actividad enzimática de AOC3/VAP-1 se ha asociado con estados inflamatorios crónicos y con la patobiología vascular, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de activación endotelial y extravasación de leucocitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VAP-1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AOC3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AOC3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AOC3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VAP-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AOC3 para la investigación de la señalización de VAP-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AOC3 críticos para la función de VAP-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AOC3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VAP-1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VAP-1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AOC3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VAP-1 (h) y el plásmido HDR VAP-1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AOC3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AOC3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.