VAMP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402306

Visão geral

VAMP3 codifica a proteína de membrana associada a vesículas 3 (VAMP-3), uma v-SNARE que medeia eventos de fusão de membranas necessários para a exocitose constitutiva e regulada. Participa no tráfego vesicular entre endossomos de reciclagem e a membrana plasmática, apoiando a reciclagem de receptores, a secreção de citocinas e o transporte de proteínas de membrana durante a migração e a polarização celular. A função da VAMP-3 cruza-se com vias de triagem endossomal e de montagem do complexo SNARE, que moldam a ativação de células imunitárias e as interações hospedeiro–patógeno. A desregulação do tráfego vesicular envolvendo VAMP3 tem sido estudada em contextos como inflamação, alterações na dinâmica de transportadores de glicose e mudanças associadas ao cancro na renovação de membrana e na invasão.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VAMP-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VAMP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VAMP3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VAMP3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VAMP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VAMP3 para a investigação da sinalização de VAMP-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VAMP3 críticos para a função VAMP-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VAMP3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VAMP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VAMP-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VAMP3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VAMP-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VAMP-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VAMP3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VAMP3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.