Plásmido Doble Nickase (h) V-ATPase C1: sc-402679-NIC

ATP6V1C1 codifica la subunidad C1 de la H+-ATPasa vacuolar humana (V-ATPasa) del dominio V1, un componente central del sector citosólico que hidroliza ATP y suministra la energía para la translocación de protones a través de las membranas endomembranosas y la membrana plasmática. La acidificación impulsada por la V-ATPasa es esencial para la maduración de endosomas y lisosomas, la endocitosis mediada por receptores, el flujo autofágico y el tráfico vesicular, y favorece el procesamiento dependiente del pH de macromoléculas dentro de las vías secretora y degradativa. Mediante la regulación del pH de los orgánulos y su acoplamiento a redes de detección de nutrientes como mTORC1 en el lisosoma, la actividad de la V-ATPasa influye en el metabolismo celular, las respuestas al estrés y el recambio de proteínas de membrana. La disfunción de la V-ATPasa y las alteraciones en la homeostasis del pH de los compartimentos se han asociado con fenotipos relevantes para la neurodegeneración, la invasión tumoral y el potencial metastásico, así como con defectos en el procesamiento de antígenos y la señalización inmunitaria, lo que convierte a ATP6V1C1 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la biología dependiente de la acidificación.

V-ATPase C1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP6V1C1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP6V1C1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP6V1C1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP6V1C1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.