V-ATPase B1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400926-NIC

ATP6V1B1 kodiert die B1‑Untereinheit der V1‑Domäne der vakuolären H+-ATPase (V‑ATPase), einer aus mehreren Untereinheiten bestehenden Protonenpumpe, die die ATP‑abhängige Ansäuerung intrazellulärer Kompartimente und spezialisierter Plasmamembrandomänen antreibt. Die V‑ATPase‑Aktivität unterstützt den vesikulären Transport, das Recycling von Rezeptoren, den lysosomalen Abbau, die Reifung von Endosomen und die pH‑abhängige Proteinprozessierung und verknüpft ATP6V1B1 damit mit der Homöostase von Organellen und der Physiologie des epithelialen Transports. In Epithelien der menschlichen Niere und des Innenohrs tragen B1‑haltige V‑ATPase‑Komplexe zur transepithelialen Protonensekretion und pH‑Regulation bei und sind in Signalwege eingebunden, die den Elektrolythaushalt sowie die Säure‑Basen‑Homöostase steuern. Eine Fehlregulation oder genetische Störung von ATP6V1B1 ist mit Erkrankungen der renalen Tubulusfunktion und des Hörvermögens assoziiert und macht das Gen zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien des Protonentransports und der Epithelphysiologie.

V-ATPase B1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V1B1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V1B1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V1B1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V1B1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.