Plasmide CRISPR/Cas9 KO UVSSA (h): sc-408933

Présentation

UVSSA (UV-stimulated scaffold protein A) est un facteur clé de la réparation par excision de nucléotides couplée à la transcription (TC-NER), où il contribue à rétablir la transcription après l’arrêt de l’ARN polymérase II sur des lésions de l’ADN induites par les UV. La protéine humaine UVSSA coopère avec CSA/ERCC8 et CSB/ERCC6 et favorise le recrutement et la stabilisation de la déubiquitinase USP7, soutenant une dynamique d’ubiquitination régulée lors de l’assemblage du complexe de réparation. Par ces activités, UVSSA contribue à l’intégrité du génome, à la reprise de la transcription après un stress génotoxique et aux réponses cellulaires à l’irradiation UV. Des défauts de la TC-NER médiée par UVSSA sont associés à une sensibilité aux UV et à des troubles du spectre du syndrome de Cockayne, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des dysfonctionnements des voies de réparation de l’ADN et de l’échec transcriptionnel induit par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UVSSA (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UVSSA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UVSSA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UVSSA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UVSSA.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UVSSA pour l'étude de la signalisation de UVSSA, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UVSSA essentiels à la fonction de UVSSA
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UVSSA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UVSSA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UVSSA plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UVSSA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UVSSA plasmide HDR (h) et le UVSSA (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UVSSA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UVSSA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.