Plasmide Double Nickase (m) UTX: sc-423635-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) UTX correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UTX Double Nickase (m) et le plasmide UTX Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Kdm6a. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UTX Antibody (E-8): sc-514859
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) UTX | sc-423635-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) UTX | sc-423635-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La Kdm6a murine code UTX, une déméthylase des histones à domaine JmjC qui élimine les marques répressives H3K27me3 afin de favoriser l’activation transcriptionnelle. UTX intervient dans le remodelage de la chromatine et la régulation des gènes du développement, en coordonnant des programmes de spécification de lignée et un contrôle épigénétique étendu de l’identité cellulaire. Elle participe à la régulation des enhancers et des promoteurs via des interactions avec des complexes de type COMPASS et d’autres régulateurs transcriptionnels, reliant la dynamique des modifications d’histones à la différenciation et à la prolifération. La dérégulation d’états de chromatine dépendants de Kdm6a/UTX a été associée à des trajectoires développementales altérées et à des programmes transcriptionnels oncogéniques, ce qui en fait un modèle utile pour l’étude de l’épigénétique et de voies pertinentes pour les maladies.
UTX Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kdm6a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kdm6a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kdm6a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kdm6a.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.