Plásmido CRISPR de Activación (h) Uteroglobin/SCGB1A1/CC10: sc-400381-ACT

SCGB1A1 codifica la uteroglobina (también conocida como CC10), un miembro secretado de la familia de las secretoglobinas producido principalmente por las células club de las vías respiratorias y otros epitelios mucosos. Esta pequeña proteína homodimérica contribuye a la homeostasis epitelial al modular la señalización inflamatoria, limitar el estrés oxidativo e influir en el metabolismo de fosfolípidos y eicosanoides en el líquido de la superficie de la vía aérea. La expresión de SCGB1A1 está estrechamente vinculada a programas de diferenciación epitelial y se utiliza con frecuencia como marcador de identidad de las células club y de remodelado de la vía aérea. Se han asociado niveles alterados de SCGB1A1 con enfermedades crónicas inflamatorias de las vías respiratorias y con respuestas a lesión epitelial, lo que la hace relevante para estudios de la función de la barrera mucosa y de la regulación de la inflamación.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SCGB1A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SCGB1A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SCGB1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SCGB1A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 en células tumorales con expresión de SCGB1A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.