USP9X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402285

Übersicht

USP9X kodiert eine ubiquitinspezifische Protease, die die Proteinstabilität reguliert, indem sie Ubiquitinketten von wichtigen Substraten entfernt und so Proteostase und Signalstärke mitprägt. USP9X wird mit der Kontrolle von Zellüberleben und Stressantworten in Verbindung gebracht, unter anderem durch Modulation von Signalwegen wie dem NF-κB-Signalweg, Netzwerken der DNA-Schadensantwort sowie Prozessen im Zusammenhang mit Membrantransport. Indem USP9X den Abbau regulatorischer Proteine und von Komponenten des Ubiquitin-Proteasom-Systems beeinflusst, wirkt es sich auf Zellzyklusprogression, Apoptose und Differenzierungsprogramme aus. Eine dysregulierte USP9X-Aktivität oder -Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit einer veränderten Signalhomöostase assoziiert, darunter in der Krebsbiologie und bei neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, was USP9X zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien macht.

Das USP9X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des USP9X-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des USP9X-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von USP9X nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die USP9X-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von USP9X-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der USP9X-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf USP9X-Exone abzielen, die für die USP9X-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere USP9X-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom USP9X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom USP9X CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des USP9X-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das USP9X HDR-Plasmid (h) und USP9X HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von USP9X-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten USP9X-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.