Partículas Lentivirales de Activación (m) USP25: sc-424423-LAC

Usp25 de ratón codifica USP25, una enzima desubiquitinante que elimina cadenas de ubiquitina de proteínas sustrato para regular su estabilidad, su tráfico y la transducción de señales. USP25 participa en el control dependiente de ubiquitina de vías inflamatorias y de inmunidad innata, incluida la modulación de nodos de señalización asociados a NF-κB y al interferón, y contribuye a la proteostasis al modular el recambio de efectores de estas vías. En la literatura, la actividad alterada de USP25 se ha relacionado con respuestas inmunitarias desreguladas y procesos neuroinflamatorios, con relevancia para mecanismos estudiados en biología de infecciones, neurodegeneración y contextos de señalización asociados a tumores. Estas propiedades hacen de Usp25 un locus útil para analizar la edición de ubiquitina en respuestas al estrés, señalización por citocinas y regulación del estado celular en sistemas de modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral USP25 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Usp25 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral USP25 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Usp25, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de USP25. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Usp25 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.