Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP24: sc-411721-ACT

Le gène humain **USP24** code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui retire des motifs ubiquitine des protéines substrats, façonnant la protéostasie en régulant la stabilité, le trafic et la sortie de signalisation des substrats. En tant que composant du système ubiquitine–protéasome, USP24 influence les réponses au stress cellulaire, la signalisation des dommages à l’ADN et le contrôle des points de contrôle (checkpoints) en modulant le renouvellement de protéines régulatrices clés. Des dynamiques de désubiquitination altérées impliquant USP24 ont été associées, dans des contextes pertinents pour la maladie, à une progression dérégulée du cycle cellulaire, à une signalisation apoptotique aberrante et à un remodelage des voies inflammatoires. Ces propriétés font d’USP24 une cible utile pour disséquer le contrôle, dépendant de l’ubiquitine, des programmes transcriptionnels et des réseaux de signalisation dans des modèles de cellules humaines.

USP24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP24 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP24 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP24, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP24. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP24 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP24 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP24 dans les cellules tumorales présentant une expression de USP24 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.