USP22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432127

Übersicht

Usp22 kodiert das deubiquitinierende Enzym USP22, eine katalytische Komponente des Transkriptions‑Coaktivator‑Komplexes SAGA, der Ubiquitin von Histon H2B und weiteren Substraten entfernt und dadurch die Chromatinzugänglichkeit sowie Genexpressionsprogramme beeinflusst. Über die Regulation der Transkriptionselongation, des Zellzyklusfortschritts und von DNA‑Schadensantworten trägt USP22 zur Koordination von Proliferation, Differenzierung und der Aufrechterhaltung der Genomintegrität bei. Die USP22‑Aktivität steht in Wechselwirkung mit epigenetischen Kontrollwegen und der ubiquitinabhängigen Proteostase und prägt kontextspezifische Signaloutputs, die in krebsrelevanten Transkriptionszuständen häufig verändert sind. Fehlregulierte USP22‑assoziierte Genexpressionssignaturen wurden mit Tumoraggressivität und stammzellähnlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seinen Nutzen für mechanistische Studien zur onkogenen Transkription und epigenetischen Plastizität unterstreicht.

Das USP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Usp22-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Usp22-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Usp22 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die USP22-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Usp22-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der USP22-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Usp22-Exone abzielen, die für die USP22-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Usp22-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom USP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom USP22 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Usp22-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das USP22 HDR-Plasmid (m) und USP22 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Usp22-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Usp22-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.