USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401713

Übersicht

USF2 kodiert den upstream stimulatory factor 2 (USF‑2), einen ubiquitär exprimierten bHLH‑Leucin‑Zipper‑Transkriptionsfaktor, der an E‑Box‑Motive bindet und die basale sowie stimulusabhängige Genexpression moduliert. USF‑2 ist an der transkriptionellen Kontrolle der metabolischen Homöostase, der Zellzyklusprogression, der Differenzierung und von Stressantworten beteiligt, indem es die Promotorarchitektur und den Chromatinkontext koordiniert reguliert. Seine Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die den Glukose- und Lipidstoffwechsel, entzündliche Signalübertragung und oxidativen Stress steuern, und kann Transkriptionsprogramme beeinflussen, die mit der Tumorbiologie verknüpft sind. Eine veränderte USF2‑Expression oder ‑Funktion wird mit dysregulierter Proliferation und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht und macht USF‑2 zu einem hilfreichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Umgestaltung transkriptioneller Netzwerke.

Das USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des USF2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des USF2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von USF2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die USF-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von USF2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der USF-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf USF2-Exone abzielen, die für die USF-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere USF2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des USF2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das USF-2 HDR-Plasmid (h) und USF-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von USF2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten USF2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.