UROS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423627

Übersicht

Uros kodiert die Uroporphyrinogen-III-Synthase (UROS), ein zytosolisches Enzym des Hämbiosynthesewegs, das Hydroxymethylbilan in Uroporphyrinogen III umwandelt, den physiologischen Vorläufer für die nachgeschaltete Porphyrin- und Hämsynthese. Dieser Schritt ist essenziell, um die zelluläre Verfügbarkeit von Häm aufrechtzuerhalten, die für die mitochondriale Atmung, die Cytochromfunktion und die Redox-Homöostase benötigt wird. Eine Störung der UROS-Aktivität führt zur Anreicherung nicht-physiologischer Porphyrin-Isomere und beeinträchtigt die erythroide Reifung sowie oxidativen Stressantworten. In Mausmodellen wird Uros häufig untersucht, um den Porphyrinstoffwechsel, die Erythropoese und Mechanismen zu erforschen, die ein Ungleichgewicht im Hämstoffwechsel mit Gewebe-Photosensitivität und anämieassoziierten Phänotypen verknüpfen.

Das UROS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Uros-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Uros-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Uros nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UROS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Uros-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UROS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Uros-Exone abzielen, die für die UROS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Uros-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UROS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UROS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Uros-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UROS HDR-Plasmid (m) und UROS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Uros-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Uros-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.