Plasmide Double Nickase (h) URE-B1: sc-404890-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) URE-B1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide URE-B1 Double Nickase (h) et le plasmide URE-B1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HUWE1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) URE-B1 | sc-404890-NIC | 20 µg | $410.00 |
HUWE1 code la protéine humaine URE-B1, une ligase E3 d’ubiquitine à domaine HECT qui catalyse le transfert d’ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines et l’amplitude des signaux. URE-B1 influence la protéostasie et les réponses au stress en ciblant des régulateurs clés de l’apoptose et de la signalisation des dommages à l’ADN, notamment des voies liées à la dynamique de p53, au contrôle du cycle cellulaire et à l’homéostasie mitochondriale. Par un remodelage des réseaux de transcription et de réparation dépendant de l’ubiquitine, HUWE1 contribue au maintien du génome et à l’adaptation cellulaire aux stress génotoxiques et protéotoxiques. Une activité dérégulée de HUWE1 a été associée à des programmes de développement altérés et à des phénotypes oncogéniques, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée dans la signalisation par l’ubiquitine et le remodelage cellulaire impliqué dans les maladies.
URE-B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HUWE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HUWE1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HUWE1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HUWE1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.