Plásmido CRISPR de Activación (h) uPAR: sc-400666-ACT

PLAUR codifica el receptor humano del activador del plasminógeno tipo uroquinasa (uPAR), un receptor de superficie celular anclado a GPI que focaliza la proteólisis al unirse a uPA y coordinar la activación del plasminógeno. A través de interacciones con integrinas, vitronectina y complejos de receptores que incluyen LRP1, uPAR modula la remodelación de la matriz extracelular, la adhesión celular, la quimiotaxis y la migración, conectando la actividad de proteasas pericelulares con el citoesqueleto y con vías de señalización como MAPK/ERK, PI3K/AKT y la dinámica de las adhesiones focales. La expresión alterada de PLAUR/uPAR se asocia con fenotipos invasivos y con remodelación inflamatoria en múltiples contextos patológicos, incluida la progresión del cáncer, la fibrosis y la patología vascular. Como regulador de cambios microambientales impulsados por proteasas, uPAR se estudia ampliamente en los mecanismos de metástasis, reparación de heridas y tráfico de células inmunitarias.

uPAR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLAUR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

uPAR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLAUR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLAUR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de uPAR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLAUR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de uPAR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía uPAR en células tumorales con expresión de PLAUR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.