UNC5H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405369

Visão geral

UNC5A codifica o receptor de netrina UNC5H1, uma molécula de orientação transmembranar que direciona a navegação dos axônios e o posicionamento neuronal por meio de sinalização dependente de ligante. O UNC5H1 participa da integração de sinais atrativos/repulsivos mediados por netrina-1 e pode influenciar a dinâmica do citoesqueleto, a adesão e o comportamento migratório por vias a jusante ligadas a GTPases da família Rho e a MAPKs. Para além do neurodesenvolvimento, a sinalização associada ao UNC5H1 tem sido relacionada à regulação da apoptose e a programas celulares do tipo epitélio–mesênquima, sustentando papéis no padrão tecidual e na homeostase. A expressão desregulada de UNC5A/UNC5H1 ou alterações no acoplamento de suas vias foram relatadas em estudos sobre transtornos do neurodesenvolvimento e biologia do câncer, onde é utilizado como um nó mecanístico para investigar a comunicação entre orientação axonal e sobrevivência celular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO UNC5H1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UNC5A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UNC5A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UNC5A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína UNC5H1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UNC5A para a investigação da sinalização de UNC5H1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UNC5A críticos para a função UNC5H1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UNC5A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo UNC5H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo UNC5H1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UNC5A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo UNC5H1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR UNC5H1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UNC5A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UNC5A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.