UMPS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423609

Descripción general

Umps codifica la sintasa de monofosfato de uridina (UMPS), una enzima bifuncional que cataliza las etapas finales de la biosíntesis de novo de pirimidinas, convirtiendo el orotato en UMP mediante las actividades de orotato fosforribosiltransferasa y descarboxilasa de orotidina-5′-fosfato. UMPS mantiene la homeostasis del pool de nucleótidos necesaria para la replicación del ADN, la síntesis de ARN y la progresión del ciclo celular, vinculando el metabolismo de las pirimidinas con la capacidad proliferativa y la estabilidad del genoma. La alteración de la función de UMPS afecta indirectamente a redes metabólicas acopladas al metabolismo de un carbono y al folato a través de cambios en la demanda de nucleótidos, y puede remodelar las respuestas celulares al estrés replicativo. La desregulación de las vías de síntesis de pirimidinas es ampliamente relevante para estudios de mecanismos de enfermedad metabólica y fenotipos proliferativos en sistemas de mamíferos, incluidos modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO UMPS (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Umps en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Umps junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Umps tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína UMPS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Umps para la investigación de la señalización de UMPS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Umps críticos para la función de UMPS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Umps para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido UMPS CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido UMPS CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Umps. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR UMPS (m) y el plásmido HDR UMPS (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Umps para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Umps definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.