Plásmido CRISPR de Activación (h) ULBP2: sc-403663-ACT

ULBP2 (proteína 2 de unión a UL16) es un ligando de NKG2D inducible por estrés, anclado a GPI, que promueve la vigilancia inmunitaria al unirse a NKG2D en células NK y linfocitos T citotóxicos. Su expresión está modulada por programas de estrés celular como las respuestas al daño del ADN, la señalización oncogénica y las señales inflamatorias, lo que vincula a ULBP2 con vías que controlan la inmunogenicidad en la superficie celular y el reconocimiento citolítico. Se ha informado de una expresión desregulada y del desprendimiento (shedding) de ULBP2 en múltiples neoplasias malignas y en contextos de inflamación crónica e infección, donde puede influir en la evasión inmunitaria y en los umbrales de activación de las células inmunes. En consecuencia, ULBP2 se estudia ampliamente como una lectura funcional del estrés celular, de las interacciones tumor–inmunidad y de los mecanismos que regulan la señalización del eje NKG2D.

ULBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ULBP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ULBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ULBP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ULBP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ULBP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ULBP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ULBP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ULBP2 en células tumorales con expresión de ULBP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.