Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT2B28: sc-404211-ACT

UGT2B28 code une UDP‑glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation de métabolites endogènes et de xénobiotiques, augmentant leur solubilité et favorisant leur élimination cellulaire. Cette activité de métabolisme de phase II contribue à la détoxification et à l’homéostasie hormonale en modulant la disponibilité de substrats dérivés des stéroïdes et d’autres composés lipophiles. L’expression d’UGT2B28 est régulée de manière dépendante du tissu et du contexte, ce qui l’associe à l’adaptation métabolique et aux réponses à l’exposition à des substances chimiques. Les modifications de l’activité d’UGT2B28 et de ses profils d’expression sont fréquemment évaluées dans des études sur le métabolisme des médicaments, la signalisation endocrinienne et des états pathologiques où la prise en charge des stéroïdes et les voies de détoxification sont perturbées.

UGT2B28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT2B28 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT2B28 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT2B28 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT2B28, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT2B28. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT2B28 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT2B28 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT2B28 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT2B28 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.