Plásmido CRISPR de Activación (h) UGT1A5: sc-402838-ACT

UGT1A5 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasa que cataliza reacciones de glucuronidación en el metabolismo de fase II, aumentando la solubilidad y favoreciendo la eliminación de diversos compuestos endógenos y xenobióticos. Como parte del locus UGT1A, UGT1A5 contribuye a redes celulares de desintoxicación que se conectan con el metabolismo hepático y extrahepático, el equilibrio redox y las respuestas al estrés químico. La variación en la actividad de la familia UGT1A se estudia ampliamente por su impacto en la disposición de fármacos, la homeostasis metabólica y la susceptibilidad a la toxicidad derivada de exposiciones ambientales. Una capacidad de glucuronidación desregulada también es relevante en modelos de disfunción hepática y en biología del cáncer, donde una conjugación alterada puede influir en metabolitos de señalización y en el manejo de xenobióticos.

UGT1A5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGT1A5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGT1A5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGT1A5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGT1A5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGT1A5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGT1A5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGT1A5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGT1A5 en células tumorales con expresión de UGT1A5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.