Plásmido CRISPR de Activación (h) UGT1A1: sc-401190-ACT

UGT1A1 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasa microsomal que cataliza la glucuronidación de la bilirrubina y de diversos compuestos endógenos lipofílicos, aumentando su solubilidad para la excreción biliar. Esta enzima de conjugación de fase II actúa en redes de desintoxicación hepáticas y extrahepáticas y se integra con la señalización de respuesta a xenobióticos que regula el metabolismo y la eliminación. La variación o la disminución de la expresión de UGT1A1 se asocia con una conjugación deficiente de la bilirrubina y con fenotipos de hiperbilirrubinemia, y la actividad de UGT1A1 también es un determinante clave del procesamiento metabólico de múltiples moléculas pequeñas. Por ello, UGT1A1 se utiliza ampliamente para estudiar la regulación de la capacidad de glucuronidación, la homeostasis metabólica hepática y las diferencias interindividuales en las vías de conjugación.

UGT1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGT1A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGT1A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGT1A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGT1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGT1A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGT1A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGT1A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGT1A1 en células tumorales con expresión de UGT1A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.