Particules Lentivirales d'Activation (h) UFM1: sc-416900-LAC

UFM1 code l’ubiquitin-fold modifier 1, une protéine de type ubiquitine qui est conjuguée à des substrats via la cascade d’UFMylation impliquant UBA5, UFC1 et la ligase E3 UFL1, avec une réversion assurée par les protéases UFSP. Cette voie régule la protéostasie du réticulum endoplasmique, le contrôle qualité associé aux ribosomes et l’adaptation au stress cellulaire, et elle s’articule avec des processus tels que la traduction des protéines, l’autophagie et la signalisation inflammatoire. La modification dépendante d’UFM1 a été reliée au maintien de la fonction de la voie sécrétoire et à la survie cellulaire en conditions de stress du RE, ce qui la rend pertinente pour des études mécanistiques du stress protéotoxique et de l’homéostasie tissulaire. Une dérégulation des composants de l’UFMylation a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux, à des anomalies hématopoïétiques et à des voies liées au cancer, ce qui soutient l’étude d’UFM1 dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales UFM1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UFM1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UFM1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UFM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UFM1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UFM1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.