Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423601
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- UDP-GlcDH Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im UDP-GlcDH-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UDP-GlcDH: sc-137058
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UDP-GlcDH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423601 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Ugdh kodiert die UDP-Glukose-6-Dehydrogenase (UDP-GlcDH), ein zytosolisches Enzym, das UDP-Glukose zu UDP-Glucuronsäure oxidiert – einem wichtigen Vorläufer für die Biosynthese von Glykosaminoglykanen und Proteoglykanen. Diese Reaktion unterstützt den Aufbau und das Remodeling der extrazellulären Matrix, indem sie Substrate für die Bildung von Hyaluronan sowie Chondroitin-/Dermatansulfat bereitstellt und dadurch Zelladhäsion, Migration und die Gewebemorphogenese beeinflusst. Die Ugdh-Aktivität verknüpft zudem den Kohlenhydratstoffwechsel mit UDP-Zucker-Umwandlungswegen, die die Zusammensetzung des Glykokalyx und die Zell-Zell-Signalgebung prägen. Eine dysregulierte Verfügbarkeit von UDP-Glucuronsäure und eine veränderte Glykosylierung der Matrix wurden in experimentellen Modellen mit veränderten Entwicklungsprogrammen, fibroseähnlichen Matrixveränderungen und krebsassoziierten Invasionsphänotypen in Verbindung gebracht.
Das UDP-GlcDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ugdh-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ugdh-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ugdh nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UDP-GlcDH-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ugdh-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UDP-GlcDH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ugdh-Exone abzielen, die für die UDP-GlcDH-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ugdh-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom UDP-GlcDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UDP-GlcDH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ugdh-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UDP-GlcDH HDR-Plasmid (m) und UDP-GlcDH HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ugdh-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ugdh-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.