Plásmido CRISPR de Activación (h) UDP-GlcDH: sc-405002-ACT

UGDH codifica la UDP‑glucosa 6‑deshidrogenasa (UDP‑GlcDH), una oxidorreductasa citosólica que cataliza la conversión de UDP‑glucosa en ácido UDP‑glucurónico, un nucleótido‑azúcar activado clave para la biosíntesis de glucosaminoglucanos y proteoglucanos. Al aportar ácido UDP‑glucurónico, la UDP‑GlcDH favorece el ensamblaje de la matriz extracelular, los programas de adhesión y migración celular, y un metabolismo más amplio de los glicoconjugados que influye en la señalización de receptores y la remodelación tisular. La actividad alterada de UGDH se ha vinculado a cambios en la composición del hialuronano y de otros glucosaminoglucanos, con asociaciones descritas con la invasividad de células tumorales, la remodelación de la matriz relacionada con la fibrosis y la dinámica del microambiente inflamatorio. Como regulador clave de las interconversiones de UDP‑azúcares, UGDH se estudia con frecuencia en vías que conectan la disponibilidad de nucleótidos‑azúcar con la mecanotransducción y las transiciones epitelio‑mesénquima.

UDP-GlcDH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGDH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UDP-GlcDH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGDH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGDH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UDP-GlcDH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGDH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UDP-GlcDH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UDP-GlcDH en células tumorales con expresión de UGDH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.